双光子成像时间能以单细胞至单突触分歧率不雅察脑皮层大齐神经元看成，连年来在神经科学限度取得平凡垄断。猕猴在理会行动、脑结构及功能方面齐接近于东说念主类，是东说念主类脑疾病、视觉理会相配他高档理会功能接洽理念念的方式动物（Hubel and Wiesel， 1968; Gross et al.， 1972; Desimone et al.， 1984; Tanaka et al.， 1991）。由于大动物存在脑名义组织增生严重、脑组织越过大、基因编码探针的抒披发手低等清贫，自大猴永劫期的双光子成像一直未能终了，成为该限度接洽的一个时间瓶颈。

北京大学生命科学学院唐世明课题组通过在猴视觉皮层显微打针腺关联病毒（AAV），品色转入基因编码探针，终昭着自大猴永劫期双光子成像。新预备的成像窗口能灵验真贵颅内感染及硬脑膜增生，保握长达数月的踏实光学质料。AAV介导的基因编码探针，包括钙探针GCaMP5和GCaMP6s（Akerboom et al.， 2012 ; Chen et al.， 2013），不错在猴视觉皮层取得永劫期高效和踏实的抒发。通过矫正头部固定安装以及图像出动修正，取得了踏实的图像和高质料的神经看成信号，最终在自大猴理会行动条目下，终昭着踏及时辰出奇6个月的双光子成像。

图1 自大猴双光子成像 （A）通过显微打针AAV转染GCaMP5钙探针的猴低级视皮层V1荧光图像（6个月）。（B）视皮层V1一个光学切面的双光子图像，在850x850微米的视场内可不雅测到多达2000个神经元。（C）三维的双光子图像，不错探伤600微米以上深度。

课题组还初次终昭着在自大猴双光子成像下，同期进行神经元胞内纪录及单细胞电转等电生理接洽及操作，施展了钙探针信号与神经元看成大界限的线性关系（10Hz-150Hz），并能终了猴脑皮层神经元稀少转染和树突成像。

图2 双光子成像下的神经元胞内纪录 （A）尖电极对一个GCaMP5转染细胞进行胞内纪录。（B-D）对细胞注入电流产生神经脉冲看成，并取得钙信号。（E）钙信号与神经元披发频率在10-150Hz界限内呈线性关系。

该职责于2017年2月16日在线发表于Neuron（Long-Term Two-Photon Imaging in Awake Macaque Monkey）。北京大学生命科学中心2014级博士接洽生李明为该论文第一作家，北京大学生命科学学院和麦戈文脑科学接洽所唐世明接洽员为该论文通信作家。该接洽得到了北大-清华生命科学集结中心、国度当然科学基金、北京市科委资助。

裁剪：山石人妖 射精